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*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的 影響及作用機(jī)制研究
點擊次數(shù):2448 更新時間:2019-12-26

目的:

通過實驗研宄,闡明*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響及作用機(jī) 制。

方法:

第1部分:*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶的影響

  • *安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響

條件性恐懼模型的復(fù)制:將實驗動物隨機(jī)分為空白對照組、模型對照組、給 藥組,每組10只。給藥組實驗動物給予*安神丸混懸液(經(jīng)灌胃途徑給予,

  • 81mg/g),空白對照組、模型對照組均給予相同體積的雙蒸水,1次/曰,連續(xù) 7日。在末次給藥后,將模型對照組、給藥組實驗動物依次放入條件性恐懼刺激 箱內(nèi),適應(yīng)120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz,75dB)。 第125秒,在聲音信號的基礎(chǔ)上給予實驗動物持續(xù)5秒的不可逃避的足底電刺激 (0.75mA)第130秒聲音信號與電刺激同時結(jié)束,130?190秒內(nèi)不做任何處理。 第190秒重復(fù)120?190秒過程,連續(xù)20次。空白對照組僅給予聲音信號不給予 電刺激,其他操作相同。結(jié)束后讓實驗動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng) 籠。

恐懼記憶習(xí)得測試:復(fù)制條件性恐懼模型的次日,將各組實驗動物依次再放 入刺激箱內(nèi),適應(yīng)120秒。在第120秒給予實驗動物單一頻率聲音信號(2000Hz, 75dB)。第130秒聲音信號結(jié)束,130?190秒內(nèi)不做任何處理,記錄聲音信號停 止后60秒內(nèi)實驗動物的值直反應(yīng)時間。第190秒重復(fù)12CM90秒過程,連續(xù)5 次。結(jié)束后讓實驗動物在刺激箱內(nèi)停留120秒后再放回飼養(yǎng)籠。記錄各組實驗動 物的僵直反應(yīng)時間,以此作為觀測指標(biāo)探究*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記 憶習(xí)得的影響。

  • *安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影響

按上述“*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實驗方法進(jìn)行

條件性恐懼模型的復(fù)制,在習(xí)得測試后的第1、3、5、7天,將各組實驗動物依 次再放入刺激箱內(nèi),重復(fù)恐懼記憶習(xí)得測試的操作,記錄各組實驗動物的僵直反 應(yīng)時間,以此作為觀測指標(biāo)探宂*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶消退的影 響。

  • *安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響

按上述“*安神丸對條件性恐懼大鼠恐懼記憶習(xí)得的影響”實驗方法進(jìn)行

條件性恐懼模型的復(fù)制,在各組實驗動物進(jìn)行條件性恐懼模型復(fù)制的次日,將各 組實驗動物放入大小鼠開場活動實驗箱內(nèi),記錄各組實驗動物運(yùn)動時間、運(yùn)動距 離,以此探究*安神丸對條件性恐懼大鼠自主活動的影響。

 

實驗儀器

條件性恐懼實驗監(jiān)測系統(tǒng)(上海欣軟信息科技有限公司,型號XR-XC404-2), 條件性恐懼刺激箱包含隔音箱和刺激箱,隔音箱為670x650x700mm的斯金納箱, 可接入攝像頭、蜂鳴器、喇叭刺激器等模塊。實驗箱尺寸為300x300x400mm的 亞克力箱,前后壁透明,左右壁黑白相間,箱子底部為(p4mm不銹鋼棒,軸間距 為16mm的不銹鋼棒,可通0?5mA恒定電流;

條件性恐懼實驗分析系統(tǒng)上海欣軟信息科技有限公司,型號:SuperFcs)

實驗結(jié)果表明:模型對照組實驗動物PS幅值變化率顯著高于空白對照組, LTP出現(xiàn)異常的增強(qiáng)。這種突觸功能可塑性的改變可能與條件性恐懼刺激過程 中,海馬出現(xiàn)應(yīng)激損傷有關(guān)。而給藥組實驗動物的PS幅值變化率顯著低于模型 對照組,與空白對照組更為接近。說明*安神丸能夠下調(diào)海馬異常增強(qiáng)的LTP 7]C平,從而恢復(fù)了海馬LTP/LTD的正常調(diào)節(jié)。

LTPLTD的誘導(dǎo)都依賴于NMDA受體,而受體激活后產(chǎn)生的是LTP還 是LTD與突觸后膜Ca?濃度升高的水平有關(guān)。Ca2+濃度迅速的大幅度增加將誘 導(dǎo)LTP而適當(dāng)程度的増加會誘導(dǎo)LTD正常情況下NMDAGlu結(jié)合后將突觸 前膜的電信號轉(zhuǎn)化成突觸后膜的Ca2+信號,使突觸后膜的Ca2+濃度升高,大量 的Ca2M乍為第二信使,可進(jìn)一步激活生化級聯(lián)反應(yīng),從而改變突觸可塑性,產(chǎn)生 LTPLTP產(chǎn)生后,突觸后膜的一些信使分子作用于突觸前膜,增強(qiáng)Glu的釋 放,維持LTP但是,慢性應(yīng)激增加海馬內(nèi)Glu含量,GluNMDA受體結(jié)合, 激活NMDA受體門控的Ca2+通道,引起Ca2+過度內(nèi)流,增強(qiáng)了 LTP, LTD受 到抑制,結(jié)果導(dǎo)致新的記憶不能與已有記憶整合,這可能是恐懼記憶難以消退的 機(jī)制之一。

綜上所述,本實驗確定了*安神丸具有促進(jìn)恐懼記憶消退的作用,其作用 機(jī)理可能是與其保護(hù)海馬神經(jīng)元,增強(qiáng)海馬突觸結(jié)構(gòu)與功能可塑性相關(guān)。對于朱 砂安神丸是否能夠加強(qiáng)LTD促進(jìn)新記憶寫入己有記憶框架,需要通過測定給 藥后實驗動物LTD的情況進(jìn)行實驗研究來驗證此假說。對于*安神丸具體改 變海馬區(qū)哪些相關(guān)蛋白的表達(dá)也有待進(jìn)一步研究證實。

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